Souris phénotypage Université UCSD …

Souris phénotypage Université UCSD ...

When les tissus du corps Sont éliminés, le procédé d’autolyse se produit RAPIDEMENT. AINSI, il is importante de FIX verser Traiter et la cire d’intégration les tissus, OU FREEZE . Dès que possible, après retrait du corps, de AFIN Preserver la morphologie des tissus versez examen histopathologique.

VOICI Quelques bons privilèges Que vous can Rechercher d’get des AFIN lignes directrices verser la nécropsie de la souris:

This site is a bon laboratoire de référence de l’avec aide les évaluations neuromusculaires – CECI inclut correctement orienté et le muscle et le nerf Traité. Appelez-les à L’Aide D’EXPERIENCES DE Planification involving les muscles et les nerfs.

Ce dernier is a bon site with des diagrammes verser secouriste à tailler les Organes avant OÜ fixation après.

Résumé de la manipulation optimale des tissus de souris:

  1. Les tissus PEUVENT Être Congelés Comme INDIQUE DANS LE "protocole de congélation".
  2. Si les tissus doivent Être FIXE, TRANSFORME, Embeded et sectionnés, les procédures Suivantes Sont recommandées:
  1. BRAIN: L’animaux is perfuser d’Abord with du PBS (tampon phosphate salin), PUI with 10% de formaline tamponnée, avant d’Ouvrir le crâne versez le BRAIN enlever verser après examen le treatment, l’intégration et la coupe. Perfusion is préférable Pour l’examen du cerveau, AFIN D’EVITER les artefacts introduits LORs de l’enlèvement du crâne.
  2. La peau, le pancréas, rate, le thymus are aplatis Entre les éponges Dans des cassettes Chapiteaux, et fixées, versez le treatment, l’intégration et la coupe. Après le treatment, la peau is soigneusement intégrée sur le bord.
  3. REINS, FOIE, COEUR: Couper les REINS ET surface placent un vers d’avion le bas, with a le segment carré de FOIE, et les Deux moitiés du cœur, Dans des cassettes Chapiteaux, et fixateur, verser le treatment, l’intégration et la coupe.
  4. Poumons: Si L’pas de Est animal perfuser, les Poumons Gonflés are with fixateur; lobe each is separate et Posé à plat Entre les éponges Dans des cassettes Chapiteaux, et Fixé, verser le treatment, l’intégration et la coupe.
  5. Les ovaires, les glandes surrénales et les ganglions lymphatiques are PLACES Dans des cassettes Chapiteaux, et fixées, versez le treatment, l’intégration et la coupe. Les testicules doivent Être Correctifs Dans la solution de juin de Bouin pendant 6 heures at least avant de passer à 70% d’alcool Dans des cassettes Chapiteaux, versez le treatment, l’enrobage et la coupe. Ces petits Organes à l’are traitées aide d’ONU “Tribunal” protocole versez generer de bonnes sections
  6. GUT: L’estomac et l’œsophage devraient Être ouverts verser fixateur de permettre penetrer et each Moitié à plat Dans Une cassette de Marquee. L’intestin grêle Doit Être échantillonné with les plaques de Peyer inclus, à partir de Différents Endroits. Les Ouvertures à des Extrêmités Chacune des tubes Sélectionnés, fixateur de penetrer permettront. Cependant, le COLON certainement obole Être ouvert et roulé Comme decrit ci-dessous, avant de fixer et de la transformation, l’enrobage et tronçonnage.
  7. Bones doivent Être dé-entartrée – voir ci-dessous. Si immunomarquages ​​are nécéssaires sur la moelle osseuse, les os doivent Être détartre Dans de l’EDTA, voir ci-dessous.
  8. Des samples de tumeur doivent Être Tranchés hachis, de Sorte Que le fixateur may bien faire son fils travail, et des cassettes PLACES Dans Chapiteaux, et fixées, versez le treatment, l’intégration et la coupe.
  9. Si immunomarquages ​​prevues, Sont pendentif ne fixe pas de plus de 24 heures de Dans 10% tamponnée de la formaline, avant de passer à Plonger dans 70% d’alcool, Dans des cassettes Chapiteaux, et fixe, versez le treatment, l’intégration et la coupe.
  10. Si immunomarquages ​​prevues SONT, ASSURER-vous Que les Contrôles Positifs et négatifs de are Series Manière Similaire. Si CELLULES DE CULTURE DE TISSUS Sont Les Contrôles Positifs et négatifs, à grandir Planifier 100 millions de cellules, les algues Porphyra Médias, ET en remettre suspension each culot de cellules, 10% du formol tamponné pendant 24 heures. Ensuite, planifiez de centrifuger à juin Pastille each ensemble de cellules et d’intégration Dans 1% Agarose DANS L’EAU, PlaceZ solidifié Agarose with the culot de cellules Entre des éponges Dans des cassettes Chapiteaux, versez le treatment, l’intégration et la coupé. Deux ous several ensembles de cellules PEUVENT Être sectionnés sur des lames verser une utilisation en juin Tant que Témoins négatifs et Positifs Dans l’immuno-histochimie (IHC voir protocoles verser en plus de détails).
  11. TISSUS adipeux: coupes congelées Difficiles Sont. La Meilleure MORPHOLOGIE Est obtenue SI Le Tissu adipeux est Couleur Enfermé Entre LES TISSUS éponge de cassettes et places des cassettes de la DANS correctement étiquetés ET DU Correctifs la DANS formol tamponné à 10% pendentif 24 heures avant d’être transfere à 70% d’alcool versez le traitemet , l’enrobage et des coupes en paraffine.

MAINTENANT POUR DEMONTRER LES DIFFERENTES TECHNIQUES Qui Doit Être used, si l’sur Travaille Avec des tissus Congelés OU with FIXE, TISSUS Traites (voir la section suivante):

tissus Congelés Qui sont correctement Gėlės octobre compund, Dans Une glace sèche / suspension isopentane (voir protocole) are cryo-coupe Dans un CRYOSTAT –Semblable à Celui Représenté sur la photographie.

Des coupes congelées are better utilisées verser des essais d’immunohistochimie, Mais le détail morphologique ne pas are bien Conserves habituellement

Le coffret is maintenu refroidi de Telle Sorte Que les coupes congelées (à 5 microns d’Épaisseur JUSQU’A 20 microns d’Épaisseur) PEUVENT Être coupés en Utilisant des Températures Qui Varient de 15 degrés Moins (pour les Organes solides est comme la vitesse, le foie, les reins, le cœur) ous at least 30 degrés (pour délicate ous difficile versez les Organes de section ous de tissus, le cerveau Comme ous le tissu adipeux).

Tissues, Congelés Qui d’Sont Pour Une utilisation histopathologique, Doivent Être Gėlės en Utilisant des protocoles Spécifiques, decrit in the "protocoles" section.

OCT (Température optimale de coupe) Compose, VWR Cat No: 25608-930) is used versez entourer et CRYOPROTECT le tissu frais, (ASSURER-Vous que les jus de tissus were Complètement effacés loin de autour du tissu sur le point de d’être congelé ) Qui est Placé Dans un moule de vinyle Avec plus de d’octobre, Puis CECI EST DANS immergé bain non d ‘ la glace sèche et 2 butane de méthyle (isopentane Cat Fisher. n ° 03551-4) REMARQUE: rappelez-vous Que l’ONU NE DOIT PAS UTILISER ETHANOLwith la glace sèche — Éthanol NE PAS congeler. ).

les taches d’huile rouge O sur le tissu adipeux doivent Être effectuees sur le Matériau congelé. Rappelez-vous rouge, il is techniquement très difficile de couper des coupes congelées de tissu adipeux, cependant, il Faut Souffrir Que faire verser les taches d’huile O

Si vous souhaitez Détecter la présence de l’étiquette de la GFP Dans les tissus, vous DEVEZ perfusion fixateur l’animale après le sacrifice, avant la congélation des Organes.

Après l’OPO DEVIENT blanc, le bloc de tissu congelé is cassé hors du moule, placez Dans des sacs en plastique étiquetés, Dans Une boîte in the congélateur de quatre-vingts Moins, JUSQU’A Ce que le Besoin se fait Sentir verser des congelées de coupés. De Chercheurs Nombreux, en outré, le lieu émincés tissus frais, paraformaldéhyde fixe à 30% de saccharose, versez cryoprotect les tissus, avant la congélation en octobre Dans notre expérience, cryoprotection in the saccharose n’à pas was juin Nécessité Pour la Plupart des Organes Que Nous Avons ANALYSES

SI NON CONGELE BIEN, les tissus se brisera pendant la coupe, et montrera ARTEFACTS FREEZE et ne PEUVENT pas Fait Être UTILISE verser des essais de immunocoloration. Rappelez-vous —- tissus Congelés are cryo-coupe, Dans cryostat un. et GELÉ sections, à 5 microns OÜ 10 microns OÜ 20 microns, are Montés Dégel, Sur des lames de verre revêtues, versez l’utilisation juin en immunohistochimie essais, en juin Utilisant Variété de Marqueurs.

Beaucoup Mieux détail Les Morphologique Est Obtenu LORs de L’Examen en Fixe, Transformes, coupes de colorées standard. Paraffine Il is préférable de marquer les cassettes-même, en Utilisant le marqueur indélébile (pas juin SHARPIE, ne pas l’encre is soluble Dans les solvants Qui sont UTILISE verser les tissus Traiter Dans de la paraffine).

Il is also très importante Que vous vous entreteniez with the histotechnologist when vous livrez l’échantillon de Telle Sorte Que Les Deux You can DETERMINER l’orientation correcte des tissus, de Sorte Que vous recevrez bien orienté, intégré, en coupe et les diapositives versent examinateur et photographier tachée. Rappelez-vous, fixateurs Prendre Un temps loooooooong verser les infiltrer tissus, de Sorte Que le plus de mâche les tranches Qui sont PLACES Dans la cassette de Marquee, better ILS will be FIXES, et se traduira par AINSI non Meilleur détail morphologique sur les coupes colorées.

Cependant, SECTIONS Se IL Y A UN PLAN D’UTILISER LES TISSUS DE FIXE POUR ANALYSES IMMUNOHISTOCHIMIQUE, ASSURER-vous Que vous vous entreteniez with the histotechnologist avance, et rappelez-vous —- ne fixent pas pendant plus de 24 heures de Dans le paraformaldéhyde ous le formol. Transfert à 70% d’alcool et de Prendre au laboratoire d’histologie Pour un treatment immédiat, AFIN d’être en mesure de Détecter des épitopes non Facilement dénaturées.

Microtome de paillasse is used versez FAIRE CES coupes en paraffine, Comme Le montre la photo.

Verser Obtenir le Meilleur détail morphologique de sections fixes, il is TRÈS IMPORTANT CE tissu frais is AMENDES TRANCHES avant d’être Placé Dans la solution de fixateur de choix. de Sorte Que le fixateur may faire fils travail correctement.

Fixateur de fines tranches de cassettes de Tissu Marqué 10 volumes de la DANS fixatif pendentif Au Moins 24 heures et le transfert à 70% d’alcool verser la transformation en paraffine.

Les amendes tranches de tissu Sont ensuite PLACES Dans des cassettes FLAT en plastique (Fisher Catalog # de 15-182-500E) ÉTIQUETÉS with # 2 crayon ous stylets Secureline II -. Fisher Cat # 1490530. NE PAS UTILISER Sharples ous des Marqueurs de laboratoire. et l’immerger Dans un fixatif Qui est at least 10 le volume de foie du tissu à fixer. Les cassettes tiendront les tissus en fixateur Pendentif Moins de 24 heures, Alors Qu’ils devraient Être transferes Dans 70% d’alcool, JUSQU’A CE qu’elles Soient traitées, Intégrées Dans PARAFFINE, ET sectionnés en 3-5 microns fines tranches , sur des lames de verre recouvertes, en Utilisant microtome un, à la température Ambiante, verser la coloration, et l’analyse de détail morphologique.

blocs de paraffine de tissu PEUVENT Être Stockes à température Ambiante Pendentif des Décennies et archive juin de Forment Important DANS LES analyses rétrospectives. Les coupes en paraffine PEUVENT Être UTILISE Dans des analyses d’immunohistochimie, but CERTAINS anticorps Ont Besoin de démasquage et / ous d’amplification avant épitopes Dans des sections de paraffine are détectables.

L’examen des embryons de souris, en Utilisant des Méthodes histologiques:

La Plupart des embryons PEUVENT Être Congelés Dans des blocs octobre Comme decrit ci-dessus, et sectionnés sagittal, with H&Es (hématoxyline et éosine, voir "protocoles") Pour la visualisation des Repères morphologiques. Les Comparaisons des types et mutantes embryons sauvages are Possibles si several sections Sont considérées. Alternativement, des coupes Coronales, de la couronne à la croupe, des anomalies also montreront. CÉS coupes congelées PEUVENT salle Être UTILISE Dans des essais de immunocoloration.

Les sections de paraffine fournissent Une bonne morphologie, il is Fait très importante, versez fixateur les embryons Plus Grands vraiment bien. Il can be Nécessaire d’Ouvrir l’abdomen Un peu verser au fixateur de permettre penetrer.

Fixation Dans la solution de Bouin (voir ci-dessous) Permet la fixation et non treatment rapide. Cependant, ne les laissez pas assis Dans Bouin pendant trop Longtemps sinon le tissu DEVIENT dur et DEVIENT difficile à Traiter et de l’article.

Fixation, orientation et traitement des embryons de souris:

Fixation: (P.Mellon laboratory UCSD) Utilisez non chiné Fraichement Prepared de 6: 3: 1 de
—L’alcool absolu: 37% de formaldéhyde (Fisher F79-4): Glaclal Acide acétique
Il’s fait frais à each foie.
Utilisez 10 ml versez les petits embryons et 15 ml verser les Grands embryons
non pendentif rotateur une nuit de PlaceZ à 4 degrés.
Le Lendemain, si les samples ne are Pas blancs, laissez-les fixer à nouveau en fixateur frais
encore pendant 24 heures.
Le Lendemain, varech with 70% d’alcool Jusqu’a Ce que l’odeur de l’acide acétique est parti.
Et Alors.

L’incorporation et l’orientation Dans Agarose:
Faire 1% d’agarose is faité DANS L’EAU
Mettre l’échantillon Dans le moule — moules de biopsie (Tissue-Tek N ° 4565,
vinyle jetable moules d’Échantillons de 10 mm x 10 mm x 5 mm)
Palce l’agarose chaud sur l’échantillon et orienteur très RAPIDEMENT le
spécimen sous le microscope
L’agarose se solidifie RAPIDEMENT
Pop sur le petit carré Formé
Dans la cassette de lieu en plastique d’enrobage Fisher cat # 15-197-700E
étiquetés de Manière appropriate with
Soit non crayon de graphite souple # 2
ous with the solvent organique résistant aux stylo-Secureline
(Fisher Cat # 450-20-FSC)
Goutte Dans 70% d’alcool
Et le faire Traiter et intégré verser les sections de paraffine

CULTURE DE TISSUS CELLULES CULTIVÉS, en Tant que les Témoins verser expériences de immunohistologiques:

GELÉ "TISSU" CONTRÔLE. culture de tissus de cellules cultivées (10-8, OU 100 millions de cellules fourniront Une bonne pastille de taille) Doit Être filé vers le bas Dans Une pastille, Lavée de médias, en non filé et culot used Comme un bloc de "tissu" Être FROZEN Dans l’octobre Comme si la congélation d’Un petit morceau de tissu.

Prévoyez de provide 100 millions de cellules Qui n’expriment pas la protéine d’interest (Contrôle négatif) et also provide à 100 millions de cellules Qui n’expriment la protéine d’interest (Contrôle positif).

fIXE "TISSU" CONTRÔLE. Le culot de cellules can be Remis en suspension Dans Fraichement Prepared paraformaldéhyde 4% et un permis de fixateur versez Moins de 6-24 heures, filée verser sédimenter, raclé sur du papier de verre, Qui est plié et les cassettes de Enfermé Dans ShurMark ous crayon, et Soumis à la transformation en blocs de paraffine.

Encore une fois, l’intention de provide 100 millions de cellules Qui n’expriment pas la protéine d’interest (Contrôle négatif) et also provide à 100 millions de cellules Qui n’expriment la protéine d’interest (Contrôle positif).

Les articles de CES Culots, are non Cellulaires Contrôle essentiel versez immunoessais sur LES TISSUS

Différents fixateurs are UTILISE à des ailettes Différentes.

Fixer des tranches hachis de tissu Dans le volume de fils 10 de foie fixateur, pendant 24 heures au Moins. Prenez les cassettes Avec le tissu Enfermé Dans fixateur un, au laboratoire d’histologie (Faites-leur savoir à l’avance) de Sorte Que les tissus PEUVENT Être Traités et Intégrés Immédiatement Dans des blocs de paraffine, versez la paraffine tronçonnage.

1. 10% de formaline tamponnée is le fixateur le plus de used couramment (Fisher Catalog # SF93-4). Cependant, vous Devez vous rappeler that the fixateur ne pénètre Que in the tissu très Lentement (? 1 mm par heure?) Et Fait, le tissu DOIT Être tranché Assez mince, versez that the fixateur de faire son fils travail correctement.

2. Fraichement MADE paraformaldéhyde 4%, fixe also bien et is used couramment, verser la fixation de perfusion, Ce Qui Rend de bonnes préparations morphologiques.

fixateur de 3. Bouin fixe rapide, et is particuliérement utile LORs de la fixation des embryons, Qui were OUVERTS Un peu au fixateur versez permettre d’infiltrer. Cependant, le fixateur de Bouin, voiture Elle fixe si bien, Doit Être Retiré du contact avec le tissu with après environ six heures de fixation, et le tissu DOIT Être rincé à l’alcool à 70%, en continuant à changer l’alcool, CE JUSQU’A Que la couleur jaune is pas discernables.

Si les tissus Sont autorisés à fixer Dans la solution de Bouin pendant trop Longtemps, ILS deviendront durs et cassants, et difficile à la section, Ce Qui entraine Dans Les sections Prépare mal

4. fixateurs du zinc du contenant are UTILISE versez Improving les posologies immunohistochimiques.

5. Il exists d’Autres fixateurs UTILISE, et des informations sur-ci Ceux is available

DÉTECTION DE Incoporated GFP (Green Fluorescent Protein) la DANS des Coupés tissulaires:

L’expérience in the laboratory was that the GFP est tres soluble, same Dans l’eau de condensation Qui se forme Quand ILS essaient de faire des coupes congelées sur des lames à Moins Qu’il est Extrêmement abondante.

Il Est Fait préférable de perfusion fixateur l’animal, avant de les retirer Les Organes de la coupe versez geler et congelée de l’examen versez la fluorescence de la GFP.

Si VOUS AVEZ déjà congelé les tissus de la souris Pour l’évaluation de la GFP incorporation, Qui sont non fixées, vous Devez Planifier d’Extraire et de test de verser la présence de la fluorescence de la GFP, en Utilisant le fluorimètre uv.

Voir le protocole GFP verser D’informations, plus

RECOMMANDATIONS SPECIFIQUES when le treatment des Organès Spécifiques POUR SECTIONS OBTENIR LES MEILLEURS POUR histopathologique EXAMEN:

CERVEAU la morphologie du cerveau is better CANDIDAT sur perfuse, des Échantillons Correctifs. Ne pas Oublier d’enlever l’hypophyse, de la Sella Turcica, après le enleve Avoir cerveau. L’hypophyse est petit et il Faudra juin attention Particulière, Souvenez-vous de conférer Avec le personnel d’histologie à this sujet.

Verser REPETER: Il is recommandé Que la fixation with PERFUSION de l’animal entier is réalisée, versez la Meilleure morphologie et d’EVITER arterfacts de gel. Verser examinateur de Façon optimale le cerveau, le plan de verser perfuseur animaux with fixateur, d’Abord with PBS, d’épuiser tout le sang, Puis perfuser with Fraichement Prepared paraformaldéhyde 4%, versez le fixateur Tous les Organes. Si les tissus Correctifs doivent Être Congelés verser utilisation juin Dans des essais de immunohistologiques, fixation après, ILS doivent Être immerge Dans 30% de saccharose à 4 degrés, JUSQU’A Ce qu’ils coulent, versez cryoprotect et Prévenir gel de artefact et la perte de l’architecture tissulaire.

La perfusion is réalisée en juin Utilisant pompe à perfusion, A travers le ventricule gauche, D’ABORD Avec Une solution saline tamponnée au phosphate, PUI with 4% Fraichement Prepared paraformaldéhyde. UTILISER juin aiguille papillon verser Entrer dans le ventricule gauche. Utilisez des ciseaux versez nick Ouvrir l’oreillette droite, de Sorte Que le sang coule est comme la circulation is Remplacé.

Si la perfusion réussie est, le foie Volontè blanch that the chanté is Remplacé, PUI les rênes. Après l’ACDE, sur observer la solution tampon est Couleur Remplacé par non fixatif Qui est perfuser A travers la circulation du corps pendentif 5-10 minutes.

Le crâne is ouvert en coupant autour du Périmètre, le locataire foramen magnum, et il is Soulève versez noceur le cerveau. Céci is enleve avec soin, verser de plus les exemples fixation ous versez la congélation en Utilisant le protocole recommandé.

Les sections Transversales offrent une vision de juin de l’ensemble du cerveau, des lobes olfactifs, au cervelet, en Particulier si les sections de pas et Différentes réalisées ET colorées Pour la visualisation.

Coronales de coupes, Se Fait la DANS des Sites Spécifiques, INDIQUE Comme sur l’image, permettent des Domaines similaires examinateur, de Sorte Qué les Comparaisons PEUVENT être Les Entre les Controles Et De Memé PORTEE mutants ANIMALS. Il Est RECOMMANDE Que des coupés Coronales de L’Ensemble du Cerveau de sujets examinés AFIN de ramasser petites- anomalies. L’examen en Utilisant des colorations spéciales et l’immunohistochimie Disséquer Anomalies aidera better.

Regardez le site de www.mbl.org verser d’Informations et plus.

sections sagittale are Faites verser la visualisation de faciliter each Moitié du cerveau, qui-peut Maintenant Être vu de caudale aux aspects rostrales, verser detecter D’éventuelles anomalies évidentes.

Les sections du cerveau PEUVENT Alors Être colorées en Utilisant les Différentes de colorations les DISPONIBLES, Comme LFB (Luxol Fast Blue, Qui a rencontré en preuve la myéline), etc.

essais d’immunohistochimie Qui vous aideront Dans les analyses anti-GFAP comprennent (fibrillaire gliale protéine acide) Qui marque astrocytes; anti-MBP (protéine basique de la myéline du) Qui marque la myéline; anti-CD68, Qui marque les macrophages (microglie), etc.

LUNG Morphologie is better CANDIDAT après perfusion de fixateur A travers la trachée, versez Gonfler TOUS les lobes.

Si sections Congelés Sont Nécessaires, Il Est Vraiment important de verser les Poumons gonfler with a chiné de 1: 1 OCT / PBS avant de les congeler Dans Une suspension de butane sèche glace / 2-méthyl. Sinon, il is Vraiment difficile d’get de bonnes coupes congelées, en essayant de couper le tissu effondré, et l’analyse morphologique AINSI Précise is impossible

Dans les études d’inhalation, et SURTOUT Dans des expériences d’écoulement EVALUER métastatique capacity de Malignes Différentes tumeurs, il est tres important de verser Poumons les gonfler fixateur with. TOUTES LES LOBES doivent Être Séparés les uns des Autres, de Sorte Que les sections de each will be EXAMINE, SECTIONS AVEC STEP, AFIN de detecter de petites- lésions.

Pour vous I’assureur Que vous recevrez les diapositives Qui contiendront une anomalie Particulière Qui was VISUALISEZ Pendentif la nécropsie, ASSURER-vous de converser with the histotechnologist when vous soumettez l’échantillon, de Sorte Que les soins de Prises Seront Pour la zone integrer d’interest , de Sorte Que CE SERA Immédiatement visible sur la lame colorée. INCLURE juin partie du tissu Qui entoure la zone anormale normale, de l’interprétation Sorte Que de la lame colorée sérums Exacte.

Le cœur devraient Être TAILLES loin d’être examinée Séparément, de sérums possible Sorte Qu’il d’view Tous les lobes des Poumons Comme INDIQUE.

Le cœur can be divisé en Deux moitiés, et Fixé Dans Une section le long juin d’cassette du foie, La Moitié d’rêne non et glandes salivaires – tout can be Fixé et Traité Dans un seul bloc pour l’enrobage. En variante, le cœur can be Séparément incorporé, de Façon Spécifique, de Telle Sorte Que les soupapes PEUVENT Être visualisées de Manière optimale, ous intégré à la première pointe, de les sections Sorte Qué révéleront les Deux ventricules Pour l’évaluation de l ‘ Épaisseur, etc.

sections Congelés de bonnes Sont de la verser des taux CONTRÔLES immunohistochimie versez les Marqueurs hématologiques. Verser ACDE, l’ensemble de la taux is integrated PLAT. au fond des moules en vinyle, en octobre avant l’immersion du moule de vinyle Dans Une suspension de gel de carboglace et 2 butane méthyle.

Pour les sections de paraffine, le SPLEEN is Enfermé Entre Deux éponges, de Sorte Qu’il est à plat Dans la cassette, la fixation avant sa. THIS procédure garantit de bonnes, des sections de paraffine plat, sans rides.

Se il y a des nodules évidents Dans la vitesse, ous il Semble anormal, ASSURER-vous that the personnel de l’histologie noter la position de de l’anomalie. de Sorte Que la région Spécifique is CORRECTEMENT EMBEDDED, versez faire en Sorte Que la section finale Qui contiendra la zone d’interest Pour l’examen microscopique et juin analyse ultérieure.

Le pancréas is la structure de gras apparaissant Qui apparait au hile adhérente de la vitesse. Retirez Autant de la masse colorée tan, plus proche de la vitesse (this zone contains généralement beaucoup des îlots) et Entre Deux éponges Dans Une cassette d’intégration Marquee de Manière appropriate avant de fixer Dans du formol tamponné. De bons plans de coupes de paraffine de is this d’organe, plus difficile à get si pas Fixé of this Manière.

RÊNES Rappelez-vous de retirer Les soigneusement les Deux surrénales avant de les Reins Traiter with. Les surrénales have also Besoin d’attention juin Particulière, voiture ILS are si petits et devront Être PLACES Dans des cassettes Séparées, may-être Avec Les ovaires, Qui sont also petites. Les ovaires PEUVENT Être Isolés en same Que temps Que la récolte des surrénales et ne pas PEUVENT Être Facilement visualisées becasue ILS par le are entourés tissu adipeux, DANS LES zones adjacentes, (ou en suivant les cornes parents utérins à partir du bassin).

Les rênes doivent Être Coupées le temps du Milieu, en Deux parties, versez noceur le cortex et de la moelle et les artères arquées, de Sorte Que le will be de des zones Comparables Entre les controles de The same PORTEE, ET Chez les mutants ANIMALS, au d’observation par microscope. Integrer Les Deux Côtes de la NVA plan de surface le Bas, Sur Le Fond des cassettes D’ENROBAGE, de Sorte Que l’organe est Couleur FIXE Tout à plates ET DonC les sections VONT noceur de morphologiques des relations avec les Meilleures

Rappelez-vous de DEMANDER Qué les articles Soient Faites À moins de 3 microns, Si possible, d’assureur non AFIN examen Adéquat des glomérules. colorations spéciales supplementaires PEUVENT Être Demandées AINSI Que immunohistochimie

VOIES INTESTINAL: COLON, iléon Saisir l’Extrémité abdominale de l’œsophage et de Commencer à éventrer le tube de digestif Jusqu’a Ce que le rectum is reached. Il Faut Prendre soin de ne pas étirer la graisse mésentérique de la récolte Sorte Que des ganglions lymphatiques mésentériques can be possible après fixation.

L’intestin grêle Doit Être sectionnée en 4-5 partis avant immersion fixation.

Les cellules epitheliales du tractus intestinal autolyse et Fait Facilement DOIT Être FIXE As Soon As Possible. Céci can be Facilement accompli en injectant fixateur Dans la lumière. De l’intestin grêle can be découpé en petits tronçons versez le fixatif de permettre penetrer Dans la muqueuse, et Soumise à l’enrobage, le treatment et la découpe, sous forme de tubes aliène Côte à Côte.

Le COLON is disséquée loin du Reste de l’intestin et Se il is importante de la présence de documenter epitheliales Tumeurs ous doucment la présence d’ulcères, le côlon Doït Être ouvert le temps de l’aspect anti-mésentérique et LAMINE. Avec la fin de la muqueuse tournée vers l’extérieur, de Sorte Que fixateur et atteindra Tous épithélium il wil Être possible de voir Toute la longueur du côlon, la section d’en juin. Pour ce faire, GUT ROLL, Prendre non bâton de l’écouvillon, rouler le côlon Fraichement ouverte sur le bâton de Sorte Qu’un rouleau is the Résultat finale compact.

NE PAS ESSAYER DE ROULER après rinçage de l’intestin in the PBS, il ne sérums pas coller Ensemble pour faire Un bon rouleau.

Toujours UTILISER la same Méthode pour rouler, nageoire anale premier Toujours ous petit bout d’intestin Abord, à l’intérieur du rouleau.

Fixer le côlon enroulé sur le bâton, Dans un tube de 15 ml de with a fixateur et à l’Soumettre histologiques plongement et tronçonnage.

côlon retroussé

OS (Habituellement du fémur et du genou) devrait Être Fixé et décalcifié avant l’enrobage et sectionner. Trois jours is reasonable généralement for the décalcification de l’os de la souris.

Si vous souhaitez faire immunohistochimie sur coupes de fémurs de souris, fixer les os d’Abord Dans du formol tamponné pendentif Deux Jours, Puis Plonger dans 5% d’EDTA pendentif 3-5 jours verser détartrer, avant de le verser Soumettre le treatment snd plongement Dans des blocs de paraffine

Le SKULL may also Être détartré et sectionné, à des Changements histopathologiques Rechercher Dans la muqueuse nasale, get juin better vue de l’hypophyse, etc. Les deux Réactifs Suivants are UTILISE régulierement versez secouriste le Processus de décalcification, DANS rapport non de 10 volumes par le volume de tissu de de:

Cal-Ex Cat -Fisher. No. CS510-1D en pot de verre ous d’ONU spécimen tasse

Ou Cal Ex-II Cat -Fisher. No. CS511-1D en pot de verre ous d’ONU spécimen tasse

1. Anesthetize les animaux, sacrifiez

2. enlever la peau de la hanche vers le bas, versez les Deux jambes

3. Retirez Toute la jambe, sur les Deux Côtes

4. Retirer MUSCLE Autant Que possible

5. Dans correctif Cal Ex-II Cat -Fisher. No. CS511-1D

6. MAIS NE les laissez Pas être Les expose un pendentif CE, plus de 3 jours

7. après 3 jours Dans Cal Ex-II, transferer les samples à 70% d’alcool

9. et Prendre des dispositions verser les samples Amener vers le laboratoire ici

10. de Sorte Que les Échantillons PEUVENT Être Series, inclus. sectionnés ET colorés verser visualiseur

a) la pathologie de la souris. Éd. Robert R. Maronpot. Cache River Press

b) di Fiore’s Atlas d’histologie. Victor P. Eroschenko Lee et Febiger

c) histologie. Un texte et Atlas. Ross, et Romrell Kaye. Williams et Wilkins

d) Histologie humaine. Stevens et Lowe. Mosby. ISBN: 0-7234-2485-3

e) Un Atlas d’histologie. Zhang. Springer. ISBN: 0-387-94954-2

f) la base pathologique de la maladie. Robbins, Kumar et Collins. Saunders.

g) La souris de laboratoire. Suckow, Danneman, Brayton. CRC Press

h) A Color Atlas of Anatomie sectionnelle de la souris. Iwaki, Yamashita, Hayakawa.

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j) Le Mouse House. Atlas du Développement embryonnaire. Theiler. Springer-Verlag

k) Manipuler l’embryon de souris, non manuel de laboratoire. Hogan, Beddington, Costantini, Lacy. Cold Spring Harbor Laboratory Press ISBN: 0-87969-384-3

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